單鏈構象多態性(英語:single-strand conformation polymorphism,简称为SSCP)是一種分離核酸的技術,可以分離相同長度但序列不同的核酸(性質類似於DGGE和TGGE,但方法不同)。
原理
在非變性條件下,單鏈核酸分子由於分子内序列互補,可形成二級和三級結構,即不同構象。在凝膠電泳中,未變性的單鏈核酸分子通過如下性質分離:
- 鏈長
- 分子间相互作用
- 一級結構:某些位點的一個核苷酸發生改變也可能影響整個構象。
實驗步驟
- 利用PCR從提取出的DNA中擴增16S rRNA基因。
- 利用λ-外切核酸酶消化掉一條鏈(其中一個PCR引物被磷酸化,這條鏈將被去除)。
- 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。
應用
- 單鏈構象多態性可用於預篩選克隆文庫。
- 可對其中的某一個條帶進行測序,並與數據庫中已知序列比對。
參見